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混合型生物洗油菌發(fā)酵上清液的表面張力值測定（三）
來源：東北石油大學三亞海洋油氣研究院 黑龍江省科學院微生物研究所 瀏覽 643 次 發(fā)布時間:2025-01-03
實施例2
表面張力測試：采用白金板測定菌株發(fā)酵上清液的表面張力。
將解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）ZZ-11、膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8、混合菌劑（解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）ZZ-11和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8按1:1數量比混合）分別接種于LB液體培養(yǎng)基中，在28~30℃條件下振蕩培養(yǎng)發(fā)酵，直至發(fā)酵液中菌落濃度達到108～109
cfu/mL。
分別取上述各組30 mL發(fā)酵菌液，10000×g室溫離心10 min，取各組發(fā)酵上清液，利用表面張力儀測定各組發(fā)酵液的表面張力，測定3次，取平均值，測試結果如表1所示。
表面張力是洗油劑對原油洗脫能力的重要指標，數值越低、洗脫能力越強。測試結果顯示解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）ZZ-11和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8發(fā)酵上清液均能降低表面張力，混合菌劑發(fā)酵上清液的表面張力值更低。
實施例3
界面張力測試：在45℃下，采用TX500C界面張力儀測定菌株發(fā)酵上清液與原油間的界面張力。
將解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）ZZ-11、膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8、混合菌劑（解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）ZZ-11和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8按1:1數量比混合）分別接種于LB液體培養(yǎng)基中，在28~30℃條件下振蕩培養(yǎng)發(fā)酵，直至發(fā)酵液中菌落濃度達到108～109cfu/mL。
分別取上述各組30 mL發(fā)酵菌液，10000×g室溫離心10 min，取各組發(fā)酵上清液，在45℃下，用TX500C界面張力儀進行測定，另取同體積的LB液體培養(yǎng)基作為空白組。當連續(xù)3次讀數之差在10-3m N/m之內時，即可認為測定的體系已經達到平衡狀態(tài)，記錄最終的界面張力，測試結果如表2所示。
從表2實驗結果中可以看出與空白相比解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）ZZ-11、膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8的界面活性好，油水界面低至1.92 mN/m和1.90mN/m，為低界面張力水平。混合菌劑的界面活性更為突出，低至0.68mN/m。
實施例4
洗油實驗：
將原油與石英砂按照質量比為1∶5攪拌均勻制備油砂，放入60℃烘箱中老化24 h，取出密封備用。
將解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）ZZ-11、膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8、混合菌劑（2組，解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens
）ZZ-11和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8按1:1和3:2數量比混合）分別接種于LB液體培養(yǎng)基中，在28~30℃條件下振蕩培養(yǎng)發(fā)酵，直至發(fā)酵液中菌落濃度達到108～109cfu/mL。
分別將上述各組30 mL發(fā)酵液倒入不同的離心管中，另取同體積30 mLLB液體培養(yǎng)基作為空白組；然后各離心管分別放入上述經過老化的15g的油砂（初始油砂含油量為2.5g），密封，均勻震蕩5次后，放入60℃烘箱靜置，24 h后取出。傾倒盡上層液體后，用20~25℃蒸餾水反復沖洗至水相無色，并收集合并沖洗液。
再將油砂烘干進行稱量（離心管+油砂），質量為m1，離心管的質量為m0。
洗油效率η通過如下公式進行計算：
η=(15-(m1-m0))/2.5
各組洗油效率測試結果如表3所示，解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）ZZ-11和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8發(fā)酵液均具有優(yōu)秀的洗油效率，本發(fā)明混合菌劑的洗油效率更為優(yōu)異，分別達到84.39%和93.32。
綜合實施例1~4的測試結果說明解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）ZZ-11、膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）ZZ-8均可作為生物洗油菌；本發(fā)明混合菌劑能將油從油砂表面分離開來，洗油后油砂潔凈、松散，有防止原油再粘附的作用，具有十分優(yōu)異的洗油效果。